ELISA双位点一步法检测原理和步骤如下：1.检测原理：测定时将待测抗原和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体互不干扰，经过一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。2.钩状效应：当待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应，显色降低，严重时可出现假阴性结果。必要时可将标本稀释后重新检测。