A选项：斜面接种法主要用于保存菌种、观察细菌的某些特性等，不是用于分离单个菌落。B选项：平板划线接种法是将混杂的细菌在平板培养基表面进行连续划线，使细菌逐渐分散，经过培养后可形成单个菌落，从而达到分离细菌的目的，该选项正确。C选项：液体接种法是将细菌接种到液体培养基中，用于增菌培养等，不能分离出单个菌落。D选项：穿刺接种法主要用于观察细菌的动力、某些生化特性等，不是分离单个菌落的方法。E选项：涂布接种法是将菌液均匀地涂布在平板培养基表面，虽然也能使细菌分散，但相比之下，平板划线接种法更有利于获得单个菌落。