限制性核酸内切酶，又称限制性内切酶、限制酶，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶，此类酶主要是从原核生物中分离纯化得到的。限制酶的发现和应用，使DNA分子能很容易地在体外被切割和连接，因此，被称为DNA重组技术中一把神奇的“手术刀”。